Vă mulțumim că ați vizitat Nature.com. Versiunea browserului pe care o utilizați are suport limitat pentru CSS. Pentru cele mai bune rezultate, vă recomandăm să utilizați un browser mai nou (sau să dezactivați modul de compatibilitate în Internet Explorer). Între timp, pentru a asigura asistență continuă, vom afișa site-ul fără stiluri și JavaScript.
Stabilirea unor modele animale de modificare modică (MC) este o bază importantă pentru studierea MC. Cincizeci și patru de iepuri albi din Noua Zeelandă au fost împărțiți în grupul cu operație simulată, grupul cu implantare musculară (grupul ME) și grupul cu implantare a nucleului pulpos (grupul NPE). În grupul NPE, discul intervertebral a fost expus prin abord chirurgical lombar anterolateral și s-a folosit un ac pentru a perfora corpul vertebral L5 în apropierea plăcii terminale. NP a fost extrasă din discul intervertebral L1/2 cu o seringă și injectată în acesta. S-a realizat o gaură în osul subcondral. Procedurile chirurgicale și metodele de forare în grupul cu implantare musculară și în grupul cu operație simulată au fost aceleași ca în grupul cu implantare NP. În grupul ME, o bucată de mușchi a fost plasată în gaură, în timp ce în grupul cu operație simulată, nu s-a plasat nimic în gaură. După operație, s-au efectuat scanări RMN și teste de biologie moleculară. Semnalul în grupul NPE s-a modificat, dar nu a existat o modificare evidentă a semnalului în grupul cu operație simulată și în grupul ME. Observațiile histologice au arătat că s-a observat o proliferare tisulară anormală la locul implantării, iar expresia IL-4, IL-17 și IFN-γ a fost crescută în grupul NPE. Implantarea NP în osul subcondral poate forma un model animal de MC.
Modificările modice (MC) sunt leziuni ale plăcilor terminale vertebrale și ale măduvei osoase adiacente, vizibile la imagistica prin rezonanță magnetică (IRM). Sunt destul de frecvente la persoanele cu simptome asociate1. Numeroase studii au subliniat importanța MC datorită asocierii sale cu durerea lombară (DL)2,3. de Roos și colab.4 și Modic și colab.5 au descris independent pentru prima dată trei tipuri diferite de anomalii ale semnalului subcondral în măduva osoasă vertebrală. Modificările modice de tip I sunt hipointense pe secvențele ponderate T1 (T1W) și hiperintense pe secvențele ponderate T2 (T2W). Această leziune dezvăluie plăci terminale fisurale și țesut de granulație vascular adiacent în măduva osoasă. Modificările modice de tip II prezintă semnal ridicat atât pe secvențele T1W, cât și pe cele T2W. În acest tip de leziune, se poate constata distrugerea plăcilor terminale, precum și înlocuirea histologică a măduvei osoase adiacente. Modificările modice de tip III prezintă semnal scăzut în secvențele T1W și T2W. Au fost observate leziuni sclerotice corespunzătoare plăcilor terminale6. MC este considerată o boală patologică a coloanei vertebrale și este strâns asociată cu multe boli degenerative ale coloanei vertebrale7,8,9.
Având în vedere datele disponibile, mai multe studii au oferit informații detaliate asupra etiologiei și mecanismelor patologice ale MC. Albert și colab. au sugerat că MC ar putea fi cauzată de hernia de disc8. Hu și colab. au atribuit MC degenerării severe a discului10. Kroc a propus conceptul de „ruptură internă a discului”, care afirmă că traumatismele repetitive ale discului pot duce la microrupturi la nivelul plăcii terminale. După formarea fisurilor, distrugerea plăcii terminale de către nucleul pulpos (NP) poate declanșa un răspuns autoimun, care duce în continuare la dezvoltarea MC11. Ma și colab. au împărtășit o opinie similară și au raportat că autoimunitatea indusă de NP joacă un rol cheie în patogeneza MC12.
Celulele sistemului imunitar, în special limfocitele T helper CD4+, joacă un rol esențial în patogeneza autoimunității13. Subsetul Th17, descoperit recent, produce citokina proinflamatoare IL-17, promovează expresia chemokinelor și stimulează celulele T din organele afectate să producă IFN-γ14. Celulele Th2 joacă, de asemenea, un rol unic în patogeneza răspunsurilor imune. Exprimarea IL-4 ca celulă Th2 reprezentativă poate duce la consecințe imunopatologice severe15.
Deși au fost efectuate numeroase studii clinice asupra MC16,17,18,19,20,21,22,23,24, există încă o lipsă de modele experimentale animale adecvate care să poată imita procesul MC, care apare frecvent la om și care pot fi utilizate pentru a investiga etiologia sau noi tratamente, cum ar fi terapia țintită. Până în prezent, au fost raportate doar câteva modele animale de MC care să studieze mecanismele patologice subiacente.
Pe baza teoriei autoimune propuse de Albert și Ma, acest studiu a stabilit un model simplu și reproductibil de MC la iepure prin autotransplantarea de nanoparticule (NP) în apropierea plăcii terminale vertebrale perforate. Alte obiective sunt observarea caracteristicilor histologice ale modelelor animale și evaluarea mecanismelor specifice ale NP în dezvoltarea MC. În acest scop, folosim tehnici precum biologia moleculară, RMN-ul și studii histologice pentru a studia progresia MC.
Doi iepuri au murit din cauza hemoragiei în timpul operației, iar patru iepuri au murit în timpul anesteziei efectuate în timpul RMN-ului. Cei 48 de iepuri rămași au supraviețuit și nu au prezentat semne comportamentale sau neurologice după operație.
RMN-ul arată că intensitatea semnalului țesutului încorporat în diferite orificii este diferită. Intensitatea semnalului corpului vertebral L5 în grupul NPE s-a modificat treptat la 12, 16 și 20 de săptămâni după inserție (secvența T1W a arătat semnal scăzut, iar secvența T2W a arătat semnal mixt plus semnal scăzut) (Fig. 1C), în timp ce aspectul RMN al celorlalte două grupuri de părți încorporate a rămas relativ stabil în aceeași perioadă (Fig. 1A, B).
(A) Imagini RMN secvențiale reprezentative ale coloanei lombare la iepure la 3 momente în timp. Nu s-au constatat anomalii de semnal în imaginile grupului cu operație simulată. (B) Caracteristicile semnalului corpului vertebral în grupul ME sunt similare cu cele din grupul cu operație simulată și nu se observă nicio modificare semnificativă a semnalului la locul de încorporare în timp. (C) În grupul NPE, semnalul scăzut este clar vizibil în secvența T1W, iar semnalul mixt și semnalul scăzut sunt clar vizibile în secvența T2W. Din perioada de 12 săptămâni până la perioada de 20 de săptămâni, semnalele înalte sporadice care înconjoară semnalele scăzute din secvența T2W scad.
Hiperplazia osoasă evidentă poate fi observată la locul de implantare al corpului vertebral în grupul NPE, iar hiperplazia osoasă apare mai rapid de la 12 la 20 de săptămâni (Fig. 2C) comparativ cu grupul NPE, fără a se observa modificări semnificative în corpurile vertebrale modelate; grupul Sham și grupul ME (Fig. 2C) 2A,B).
(A) Suprafața corpului vertebral la nivelul porțiunii implantate este foarte netedă, gaura se vindecă bine și nu există hiperplazie în corpul vertebral. (B) Forma locului implantat în grupul ME este similară cu cea din grupul cu operație simulată și nu există nicio modificare evidentă a aspectului locului implantat în timp. (C) Hiperplazia osoasă a apărut la locul implantat în grupul NPE. Hiperplazia osoasă a crescut rapid și chiar s-a extins prin discul intervertebral până la corpul vertebral contralateral.
Analiza histologică oferă informații mai detaliate despre formarea osoasă. Figura 3 prezintă fotografiile secțiunilor postoperatorii colorate cu H&E. În grupul cu operație simulată, condrocitele au fost bine aranjate și nu s-a detectat nicio proliferare celulară (Fig. 3A). Situația din grupul ME a fost similară cu cea din grupul cu operație simulată (Fig. 3B). Cu toate acestea, în grupul NPE, s-au observat un număr mare de condrocite și proliferarea celulelor de tip NP la locul implantării (Fig. 3C);
(A) Trabeculele pot fi observate în apropierea plăcii terminale, condrocitele sunt aranjate frumos, cu dimensiuni și forme celulare uniforme și fără proliferare (de 40 de ori). (B) Starea locului de implantare în grupul ME este similară cu cea a grupului sham. Trabeculele și condrocitele pot fi observate, dar nu există o proliferare evidentă la locul de implantare (de 40 de ori). (B) Se poate observa că condrocitele și celulele de tip NP proliferează semnificativ, iar forma și dimensiunea condrocitelor sunt inegale (de 40 de ori).
Expresia ARNm al interleukinei 4 (IL-4), ARNm al interleukinei 17 (IL-17) și ARNm al interferonului γ (IFN-γ) a fost observată atât în grupul NPE, cât și în grupul ME. Când au fost comparate nivelurile de expresie ale genelor țintă, expresiile genice ale IL-4, IL-17 și IFN-γ au fost semnificativ crescute în grupul NPE comparativ cu cele ale grupului ME și ale grupului cu operație simulată (Fig. 4) (P < 0,05). Comparativ cu grupul cu operație simulată, nivelurile de expresie ale IL-4, IL-17 și IFN-γ în grupul ME au crescut doar ușor și nu au atins o modificare statistică (P > 0,05).
Expresia ARNm a IL-4, IL-17 și IFN-γ în grupul NPE a arătat o tendință semnificativ mai mare decât cea din grupul cu operație simulată și grupul ME (P < 0,05).
În schimb, nivelurile de expresie din grupul ME nu au arătat nicio diferență semnificativă (P>0,05).
Analiza Western blot a fost efectuată utilizând anticorpi disponibili comercial împotriva IL-4 și IL-17 pentru a confirma modelul modificat de expresie a ARNm. După cum se arată în Figurile 5A,B, comparativ cu grupul ME și grupul cu operație simulată, nivelurile proteice ale IL-4 și IL-17 în grupul NPE au fost semnificativ crescute (P < 0,05). Comparativ cu grupul cu operație simulată, nivelurile proteice ale IL-4 și IL-17 în grupul ME nu au reușit să atingă modificări semnificative statistic (P > 0,05).
(A) Nivelurile proteice ale IL-4 și IL-17 în grupul NPE au fost semnificativ mai mari decât cele din grupul ME și grupul placebo (P < 0,05). (B) Histogramă Western blot.
Datorită numărului limitat de probe umane obținute în timpul intervenției chirurgicale, studiile clare și detaliate privind patogeneza MC sunt oarecum dificile. Am încercat să stabilim un model animal de MC pentru a studia potențialele sale mecanisme patologice. În același timp, s-au utilizat evaluarea radiologică, evaluarea histologică și evaluarea biologică moleculară pentru a urmări evoluția MC indusă de autogrefa de nanoparticule (NP). Drept urmare, modelul de implantare a NP a dus la o modificare treptată a intensității semnalului de la 12 săptămâni la 20 de săptămâni (semnal scăzut mixt în secvențele T1W și semnal scăzut în secvențele T2W), indicând modificări tisulare, iar evaluările histologice și biologice moleculare au confirmat rezultatele studiului radiologic.
Rezultatele acestui experiment arată că au apărut modificări vizuale și histologice la locul leziunii corpului vertebral în grupul NPE. În același timp, s-a observat expresia genelor IL-4, IL-17 și IFN-γ, precum și a IL-4, IL-17 și IFN-γ, indicând faptul că leziunea țesutului autolog al nucleului pulpos în corpul vertebral poate provoca o serie de modificări de semnal și morfologice. Este ușor de observat că caracteristicile semnalului corpurilor vertebrale ale modelului animal (semnal scăzut în secvența T1W, semnal mixt și semnal scăzut în secvența T2W) sunt foarte similare cu cele ale celulelor vertebrale umane, iar caracteristicile RMN confirmă, de asemenea, observațiile histologice și anatomice macroscopice, adică modificările celulelor corpului vertebral sunt progresive. Deși răspunsul inflamator cauzat de traumatismul acut poate apărea la scurt timp după puncție, rezultatele RMN au arătat că modificările progresive ale semnalului au apărut la 12 săptămâni după puncție și au persistat până la 20 de săptămâni fără semne de recuperare sau inversare a modificărilor RMN. Aceste rezultate sugerează că NP vertebrală autologă este o metodă fiabilă pentru stabilirea VM progresivă la iepuri.
Acest model de puncție necesită îndemânare, timp și efort chirurgical adecvate. În experimentele preliminare, disecția sau stimularea excesivă a structurilor ligamentoase paravertebrale poate duce la formarea de osteofite vertebrale. Trebuie avută grijă să nu se deterioreze sau irite discurile adiacente. Deoarece adâncimea de penetrare trebuie controlată pentru a obține rezultate consistente și reproductibile, am realizat manual un dop prin tăierea tecii unui ac lung de 3 mm. Utilizarea acestui dop asigură o adâncime uniformă de perforare în corpul vertebral. În experimentele preliminare, trei chirurgi ortopezi implicați în operație au constatat că acele de calibru 16 sunt mai ușor de utilizat decât acele de calibru 18 sau alte metode. Pentru a evita sângerarea excesivă în timpul perforației, menținerea acului nemișcat o perioadă va oferi un orificiu de inserție mai potrivit, sugerând că un anumit grad de MC poate fi controlat în acest fel.
Deși multe studii au vizat MC, se cunosc puține lucruri despre etiologia și patogeneza MC25,26,27. Pe baza studiilor noastre anterioare, am descoperit că autoimunitatea joacă un rol cheie în apariția și dezvoltarea MC12. Acest studiu a examinat expresia cantitativă a IL-4, IL-17 și IFN-γ, care sunt principalele căi de diferențiere a celulelor CD4+ după stimularea cu antigen. În studiul nostru, comparativ cu grupul negativ, grupul NPE a avut o expresie mai mare a IL-4, IL-17 și IFN-γ, iar nivelurile proteice ale IL-4 și IL-17 au fost, de asemenea, mai mari.
Clinic, expresia ARNm a IL-17 este crescută în celulele NP de la pacienții cu hernie de disc28. Niveluri crescute de expresie a IL-4 și IFN-γ au fost, de asemenea, constatate într-un model de hernie de disc acută necompresivă, comparativ cu grupul de control sănătos29. IL-17 joacă un rol cheie în inflamație, leziuni tisulare în bolile autoimune30 și amplifică răspunsul imun la IFN-γ31. Leziuni tisulare mediate de IL-17 crescute au fost raportate la șoareci MRL/lpr32 și șoareci sensibili la autoimunitate33. IL-4 poate inhiba expresia citokinelor proinflamatorii (cum ar fi IL-1β și TNFα) și activarea macrofagelor34. S-a raportat că expresia ARNm a IL-4 a fost diferită în grupul NPE comparativ cu IL-17 și IFN-γ în același moment; expresia ARNm a IFN-γ în grupul NPE a fost semnificativ mai mare decât în celelalte grupuri. Prin urmare, producția de IFN-γ poate fi un mediator al răspunsului inflamator indus de intercalarea NP. Studiile au arătat că IFN-γ este produs de mai multe tipuri de celule, inclusiv celulele T helper de tip 1 activate, celulele natural killer și macrofagele35,36 și este o citokină proinflamatoare cheie care promovează răspunsurile imune37.
Acest studiu sugerează că răspunsul autoimun ar putea fi implicat în apariția și dezvoltarea MC. Luoma și colab. au descoperit că caracteristicile semnalului MC și ale nanoparticulelor (NP) proeminente sunt similare la RMN și ambele prezintă un semnal ridicat în secvența T2W38. Unele citokine au fost confirmate ca fiind strâns asociate cu apariția MC, cum ar fi IL-139. Ma și colab. au sugerat că proeminența ascendentă sau descendentă a NP ar putea avea o mare influență asupra apariției și dezvoltării MC12. Bobechko40 și Herzbein și colab.41 au raportat că NP este un țesut imunotolerant care nu poate intra în circulația vasculară de la naștere. Proeminențele NP introduc corpuri străine în alimentarea cu sânge, mediând astfel reacțiile autoimune locale42. Reacțiile autoimune pot induce un număr mare de factori imuni, iar atunci când acești factori sunt expuși continuu țesuturilor, pot provoca modificări ale semnalizării43. În acest studiu, supraexprimarea IL-4, IL-17 și IFN-γ sunt factori imuni tipici, dovedind în continuare relația strânsă dintre NP și MC44. Acest model animal imită bine penetrarea NP în placa terminală. Acest proces a relevat în continuare impactul autoimunității asupra celulelor măduvei de măduvă (MC).
Așa cum era de așteptat, acest model animal ne oferă o posibilă platformă pentru studierea MC. Cu toate acestea, acest model are încă unele limitări: în primul rând, în timpul fazei de observare a animalelor, unii iepuri în stadiu intermediar trebuie eutanasiați pentru teste histologice și de biologie moleculară, astfel încât unele animale „își pierd timpul de utilizare” în timp. În al doilea rând, deși în acest studiu sunt stabilite trei momente, din păcate, am modelat un singur tip de MC (schimbarea de tip Modic I), deci nu este suficient pentru a reprezenta procesul de dezvoltare a bolii umane și trebuie stabilite mai multe momente pentru a observa mai bine toate modificările semnalului. În al treilea rând, modificările structurii țesuturilor pot fi într-adevăr demonstrate clar prin colorare histologică, dar unele tehnici specializate pot dezvălui mai bine modificările microstructurale în acest model. De exemplu, microscopia cu lumină polarizată a fost utilizată pentru a analiza formarea fibrocartilajului în discurile intervertebrale de iepure45. Efectele pe termen lung ale NP asupra MC și a plăcii terminale necesită studii suplimentare.
Cincizeci și patru de iepuri albi masculi din Noua Zeelandă (greutate aproximativă 2,5-3 kg, vârstă 3-3,5 luni) au fost împărțiți aleatoriu în grupul de operație simulată, grupul de implantare musculară (grupul ME) și grupul de implantare a rădăcinilor nervoase (grupul NPE). Toate procedurile experimentale au fost aprobate de Comitetul de Etică al Spitalului Tianjin, iar metodele experimentale au fost efectuate în strictă conformitate cu ghidurile aprobate.
S-au adus unele îmbunătățiri tehnicii chirurgicale efectuate de S. Sobajima 46. Fiecare iepure a fost plasat în decubit lateral, iar suprafața anterioară a cinci discuri intervertebrale lombare (IVD) consecutive a fost expusă utilizând o abordare posterolaterală retroperitoneală. Fiecărui iepure i s-a administrat anestezie generală (uretan 20%, 5 ml/kg prin vena urechii). S-a efectuat o incizie longitudinală a pielii de la marginea inferioară a coastelor până la marginea pelviană, la 2 cm ventral față de mușchii paravertebrali. Coloana vertebrală anterolaterală dreaptă de la L1 la L6 a fost expusă prin disecție ascuțită și bontă a țesutului subcutanat suprapus, a țesutului retroperitoneal și a mușchilor (Fig. 6A). Nivelul discului a fost determinat utilizând marginea pelviană ca reper anatomic pentru nivelul discului L5-L6. Se utilizează un ac de puncție de calibru 16 pentru a perfora un orificiu în apropierea plăcii terminale a vertebrei L5 la o adâncime de 3 mm (Fig. 6B). Se utilizează o seringă de 5 ml pentru a aspira nucleul pulpos autolog din discul intervertebral L1-L2 (Fig. 6C). Se îndepărtează nucleul pulpos sau mușchiul în funcție de cerințele fiecărui grup. După adâncirea orificiului, se plasează suturi absorbabile pe fascia profundă, fascia superficială și piele, având grijă să nu se deterioreze țesutul periostal al corpului vertebral în timpul intervenției chirurgicale.
(A) Discul L5-L6 este expus printr-o abordare posterolaterală retroperitoneală. (B) Se utilizează un ac de calibru 16 pentru a perfora un orificiu în apropierea plăcii terminale L5. (C) Se recoltează celule fibroblastice autologe.
Anestezia generală a fost administrată cu uretan 20% (5 ml/kg) administrat prin vena urechii, iar radiografiile coloanei lombare au fost repetate la 12, 16 și 20 de săptămâni postoperator.
Iepurii au fost sacrificați prin injecție intramusculară de ketamină (25,0 mg/kg) și pentobarbital sodic intravenos (1,2 g/kg) la 12, 16 și 20 de săptămâni după operație. Întreaga coloană vertebrală a fost îndepărtată pentru analiza histologică și s-a efectuat o analiză reală. Transcripția inversă cantitativă (RT-qPCR) și Western blot au fost utilizate pentru a detecta modificările factorilor imuni.
Examinările RMN au fost efectuate la iepuri utilizând un magnet clinic de 3,0 T (GE Medical Systems, Florence, SC) echipat cu un receptor ortogonal pentru membre. Iepurii au fost anesteziați cu uretan 20% (5 mL/kg) prin vena urechii și apoi plasați în decubit dorsal în interiorul magnetului, cu regiunea lombară centrată pe o bobină de suprafață circulară cu diametrul de 5 inci (GE Medical Systems). Au fost achiziționate imagini localizatoare coronale ponderate T2 (TR, 1445 ms; TE, 37 ms) pentru a defini locația discului lombar de la L3-L4 la L5-L6. Secțiunile ponderate T2 în plan sagital au fost achiziționate cu următoarele setări: secvență rapidă de spin-echo cu un timp de repetiție (TR) de 2200 ms și un timp de ecou (TE) de 70 ms, matrice; câmp vizual de 260 și opt stimuli; Grosimea tăierii a fost de 2 mm, iar spațiul a fost de 0,2 mm.
După ce a fost făcută ultima fotografie și ultimul iepure a fost sacrificat, discurile simulate, cele cu mușchi încorporați și cele cu NP au fost îndepărtate pentru examinare histologică. Țesuturile au fost fixate în formalină tamponată neutră 10% timp de 1 săptămână, decalcificate cu acid etilendiaminotetraacetic și secționate în parafină. Blocurile de țesut au fost încorporate în parafină și tăiate în secțiuni sagitale (grosime de 5 μm) folosind un microtom. Secțiunile au fost colorate cu hematoxilină și eozină (H&E).
După colectarea discurilor intervertebrale de la iepurii din fiecare grup, ARN-ul total a fost extras utilizând o coloană UNIQ-10 (Shanghai Sangon Biotechnology Co., Ltd., China) conform instrucțiunilor producătorului și un sistem de transcripție inversă ImProm II (Promega Inc., Madison, WI, SUA). A fost efectuată transcripția inversă.
RT-qPCR a fost efectuată utilizând un aparat Prism 7300 (Applied Biosystems Inc., SUA) și SYBR Green Jump Start Taq ReadyMix (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, SUA), conform instrucțiunilor producătorului. Volumul reacției PCR a fost de 20 μl și conținea 1,5 μl de ADNc diluat și 0,2 μM din fiecare primer. Primerii au fost proiectați de OligoPerfect Designer (Invitrogen, Valencia, CA) și fabricați de Nanjing Golden Stewart Biotechnology Co., Ltd. (China) (Tabelul 1). Au fost utilizate următoarele condiții de ciclare termică: etapa inițială de activare a polimerazei la 94°C timp de 2 minute, apoi 40 de cicluri de câte 15 secunde fiecare la 94°C pentru denaturarea șablonului, recoacere timp de 1 minut la 60°C, extensie și fluorescență. Măsurătorile au fost efectuate timp de 1 minut la 72°C. Toate probele au fost amplificate de trei ori, iar valoarea medie a fost utilizată pentru analiza RT-qPCR. Datele de amplificare au fost analizate utilizând FlexStation 3 (Molecular Devices, Sunnyvale, CA, SUA). Expresia genelor IL-4, IL-17 și IFN-γ a fost normalizată față de controlul endogen (ACTB). Nivelurile relative de expresie ale ARNm țintă au fost calculate utilizând metoda 2-ΔΔCT.
Proteina totală a fost extrasă din țesuturi folosind un omogenizator de țesuturi în tampon de liză RIPA (care conține un cocktail inhibitor de protează și fosfatază) și apoi centrifugată la 13.000 rpm timp de 20 de minute la 4°C pentru a îndepărta resturile tisulare. Cincizeci de micrograme de proteină au fost încărcate pe bandă, separate prin SDS-PAGE 10% și apoi transferate pe o membrană PVDF. Blocarea a fost efectuată în lapte praf degresat 5% în soluție salină tamponată cu Tris (TBS) conținând 0,1% Tween 20 timp de 1 oră la temperatura camerei. Membrana a fost incubată peste noapte la 4°C cu anticorp primar de iepure anti-decorină (diluat 1:200; Boster, Wuhan, China) (diluat 1:200; Bioss, Beijing, China) și a reacționat în a doua zi; cu anticorp secundar (imunoglobulină G de capră anti-iepure la diluție 1:40.000) combinat cu peroxidază de hrean (Boster, Wuhan, China) timp de 1 oră la temperatura camerei. Semnalele Western blot au fost detectate prin creșterea chemiluminescenței pe membrana chemiluminescentă după iradierea cu raze X. Pentru analiza densitometrică, bloturile au fost scanate și cuantificate folosind software-ul BandScan, iar rezultatele au fost exprimate ca raportul dintre imunoreactivitatea genei țintă și imunoreactivitatea tubulinei.
Calculele statistice au fost efectuate utilizând pachetul software SPSS 16.0 (SPSS, SUA). Datele colectate în timpul studiului au fost exprimate ca medie ± deviație standard (medie ± SD) și analizate folosind analiza varianței cu măsurători repetate unidirecționale (ANOVA) pentru a determina diferențele dintre cele două grupuri. O valoare P < 0,05 a fost considerată semnificativă statistic.
Astfel, stabilirea unui model animal de MC prin implantarea de nanoparticule autologe în corpul vertebral și efectuarea observațiilor macroanatomice, a analizei RMN, a evaluării histologice și a analizei biologice moleculare poate deveni un instrument important pentru evaluarea și înțelegerea mecanismelor MC umane și pentru dezvoltarea de noi intervenții terapeutice.
Cum se citează acest articol: Han, C. și colab. Un model animal al modificărilor Modic a fost stabilit prin implantarea nucleului pulpos autolog în osul subcondral al coloanei vertebrale lombare. Sci. Rep. 6, 35102: 10.1038/srep35102 (2016).
Weishaupt, D., Zanetti, M., Hodler, J. și Boos, N. Imagistica prin rezonanță magnetică a coloanei lombare: prevalența herniei și retenției de disc, compresia rădăcinii nervoase, anomaliile plăcilor terminale și osteoartrita articulației fațetare la voluntarii asimptomatici. *Rate*. Radiology 209, 661–666, doi:10.1148/radiology.209.3.9844656 (1998).
Kjaer, P., Korsholm, L., Bendix, T., Sorensen, JS și Leboeuf-Eed, K. Modificări modice și relația acestora cu constatările clinice. European Spine Journal: publicație oficială a European Spine Society, European Society of Spinal Deformity și European Society for Cervical Spine Research 15, 1312–1319, doi: 10.1007/s00586-006-0185-x (2006).
Kuisma, M. și colab. Modificări modice ale plăcilor terminale ale vertebrelor lombare: prevalență și asociere cu durerile lombare și sciatica la lucrătorii de sex masculin de vârstă mijlocie. Spine 32, 1116–1122, doi:10.1097/01.brs.0000261561.12944.ff (2007).
de Roos, A., Kressel, H., Spritzer, K. și Dalinka, M. RMN-ul modificărilor măduvei osoase în apropierea plăcii terminale în bolile degenerative ale coloanei lombare. AJR. American Journal of Radiology 149, 531–534, doi: 10.2214/ajr.149.3.531 (1987).
Modic, MT, Steinberg, PM, Ross, JS, Masaryk, TJ și Carter, JR Boala degenerativă a discului: evaluarea modificărilor măduvei vertebrale prin RMN. Radiology 166, 193–199, doi:10.1148/radiology.166.1.3336678 (1988).
Modic, MT, Masaryk, TJ, Ross, JS și Carter, JR Imagistica bolilor degenerative de disc. Radiology 168, 177–186, doi: 10.1148/radiology.168.1.3289089 (1988).
Jensen, TS și colab. Predictorii plăcii terminale neovertebrale (Modic) semnalează modificări în populația generală. European Spine Journal: Publicație oficială a Societății Europene a Coloanei Vertebrale, a Societății Europene de Deformitate Spinală și a Societății Europene pentru Cercetarea Coloanei Cervicale, Divizia 19, 129–135, doi: 10.1007/s00586-009-1184-5 (2010).
Albert, HB și Mannisch, K. Modificări modice după hernia de disc lombară. European Spine Journal: Publicație oficială a Societății Europene a Coloanei Vertebrale, a Societății Europene de Deformități Spinale și a Societății Europene pentru Cercetarea Coloanei Cervicale 16, 977–982, doi: 10.1007/s00586-007-0336-8 (2007).
Kerttula, L., Luoma, K., Vehmas, T., Gronblad, M. și Kaapa, E. Modificările modice de tip I pot prezice degenerarea discală deformantă rapid progresivă: un studiu prospectiv de 1 an. European Spine Journal 21, 1135–1142, doi: 10.1007/s00586-012-2147-9 (2012).
Hu, ZJ, Zhao, FD, Fang, XQ și Fan, SW Modificări modice: posibile cauze și contribuție la degenerarea discului lombar. Medical Hypothesises 73, 930–932, doi: 10.1016/j.mehy.2009.06.038 (2009).
Krok, HV Ruptură internă de disc. Probleme de prolaps de disc pe parcursul a peste 50 de ani. Spine (Phila Pa 1976) 11, 650–653 (1986).
Data publicării: 13 decembrie 2024