• noi

Nucleul autolog pulposus implantat în osul subcondral lombar pentru a crea un model animal de modificări modice

Vă mulțumim că ați vizitat Nature.com. Versiunea browserului pe care o utilizați are suport CSS limitat. Pentru cele mai bune rezultate, vă recomandăm să utilizați un browser mai nou (sau să dezactivați modul de compatibilitate în Internet Explorer). Între timp, pentru a asigura sprijinul continuu, vom afișa site -ul fără stiluri și JavaScript.
Stabilirea modelelor animale de schimbare modică (MC) este o bază importantă pentru studierea MC. Cincizeci și patru de iepuri albi din Noua Zeelandă au fost împărțiți în grupul de operare de rușine, grupul de implantare musculară (grupul ME) și grupul de implantare a nucleului pulposus (grupul NPE). În grupul NPE, discul intervertebral a fost expus prin abordare chirurgicală lombară anterolaterală și a fost utilizat un ac pentru a puncta corpul vertebral L5 lângă placa de capăt. NP a fost extras din discul intervertebral L1/2 de către o seringă și injectat în el. Forajarea unei gauri în osul subcondral. Procedurile chirurgicale și metodele de foraj din grupul de implantare musculară și grupul de operare de rușine au fost aceleași cu cele din grupul de implantare NP. În grupul ME, o bucată de mușchi a fost introdusă în gaură, în timp ce în grupul de operare de rușine, nu a fost introdus nimic în gaură. După operație, s -au efectuat scanarea RMN și teste biologice moleculare. Semnalul din grupul NPE s-a schimbat, dar nu a existat o schimbare evidentă a semnalului în grupul de operare de rușine și în grupul ME. Observația histologică a arătat că a fost observată o proliferare anormală a țesuturilor la locul de implantare, iar expresia IL-4, IL-17 și IFN-y a fost crescută în grupul NPE. Implantarea NP în osul subcondral poate forma un model animal de MC.
Modificările modice (MC) sunt leziuni ale finalelor vertebrale și ale măduvei osoase adiacente vizibile pe imagistica prin rezonanță magnetică (RMN). Sunt destul de frecvente la persoanele cu simptome asociate1. Multe studii au subliniat importanța MC datorită asocierii sale cu dureri de spate scăzute (LBP) 2,3. De Roos și colab.4 și Modic și colab.5 au descris în mod independent trei tipuri diferite de anomalii ale semnalului subcondral în măduva osoasă vertebrală. Modificările modice de tip I sunt hipointense pe secvențele cu greutate T1 (T1W) și hiperintense pe secvențe cu greutate T2 (T2W). Această leziune dezvăluie finală de fisură și țesut de granulație vasculară adiacentă în măduva osoasă. Modificările modice de tip II prezintă un semnal ridicat atât pe secvențele T1W cât și pe T2W. În acest tip de leziune, poate fi găsită distrugerea plăcii finale, precum și înlocuirea histologică grasă a măduvei osoase adiacente. Modificările modice de tip III arată semnal scăzut în secvențele T1W și T2W. Au fost observate leziuni sclerotice corespunzătoare plăcilor finale6. MC este considerat o boală patologică a coloanei vertebrale și este strâns asociată cu multe boli degenerative ale coloanei vertebrale7,8,9.
Având în vedere datele disponibile, mai multe studii au oferit informații detaliate despre etiologia și mecanismele patologice ale MC. Albert și colab. a sugerat că MC poate fi cauzată de herniația discului8. Hu și colab. a atribuit MC la degenerarea severă a discului10. Kroc a propus conceptul de „rupere a discului intern”, care afirmă că trauma repetitivă a discului poate duce la microtear în platoul final. După formarea fantei, distrugerea finală a plăcii de către nucleul pulposus (NP) poate declanșa un răspuns autoimun, ceea ce duce în continuare la dezvoltarea MC11. Ma și colab. a împărtășit o viziune similară și a raportat că autoimunitatea indusă de NP joacă un rol cheie în patogeneza MC12.
Celulele sistemului imunitar, în special limfocitele de ajutor CD4+ T, joacă un rol critic în patogeneza autoimunității13. Subsetul Th17 recent descoperit produce citokina proinflamatorie IL-17, promovează expresia chemokinei și stimulează celulele T în organele deteriorate pentru a produce IFN-y14. Celulele Th2 joacă, de asemenea, un rol unic în patogeneza răspunsurilor imune. Expresia IL-4 ca celulă reprezentativă Th2 poate duce la consecințe imunopatologice severe15.
Deși multe studii clinice au fost efectuate pe MC16,17,18,19,20,21,22,23,24, există încă o lipsă de modele experimentale pentru animale adecvate care pot imita procesul MC care apare frecvent la om și poate fi Folosit pentru a investiga etiologia sau noi tratamente, cum ar fi terapia vizată. Până în prezent, au fost raportate doar câteva modele animale de MC să studieze mecanismele patologice care stau la baza.
Pe baza teoriei autoimune propuse de Albert și MA, acest studiu a stabilit un model MC de iepure simplu și reproductibil prin autotransplantarea NP în apropierea plăcii de capăt vertebrale găurite. Alte obiective sunt observarea caracteristicilor histologice ale modelelor animale și evaluarea mecanismelor specifice ale NP în dezvoltarea MC. În acest scop, folosim tehnici precum biologie moleculară, RMN și studii histologice pentru a studia progresia MC.
Doi iepuri au murit din cauza sângerării în timpul operației, iar patru iepuri au murit în timpul anesteziei în timpul RMN. Restul de 48 de iepuri au supraviețuit și nu au prezentat semne comportamentale sau neurologice după operație.
RMN arată că intensitatea semnalului țesutului încorporat în diferite găuri este diferită. Intensitatea semnalului corpului vertebral L5 în grupul NPE s -a schimbat treptat la 12, 16 și 20 de săptămâni de la inserare (secvența T1W a prezentat semnal scăzut, iar secvența T2W a arătat semnal mixt plus semnal scăzut) (Fig. 1C), în timp ce aparițiile RMN Dintre celelalte două grupuri de părți încorporate au rămas relativ stabile în aceeași perioadă (Fig. 1A, B).
(A) RMN -uri secvențiale reprezentative ale coloanei vertebrale lombare a iepurelui la 3 puncte de timp. Nu au fost găsite anomalii de semnal în imaginile grupului de operare de rușine. (B) Caracteristicile semnalului corpului vertebral din grupul ME sunt similare cu cele din grupul de operare de rușine și nu se observă nicio modificare semnificativă a semnalului la locul de încorporare în timp. (C) În grupul NPE, semnalul scăzut este clar vizibil în secvența T1W, iar semnalul mixt și semnalul scăzut sunt clar vizibile în secvența T2W. Din perioada de 12 săptămâni până la perioada de 20 de săptămâni, semnalele sporadice înalte care înconjoară semnalele scăzute în secvența T2W scad.
Hiperplazia osoasă evidentă poate fi observată la locul de implantare al corpului vertebral în grupul NPE, iar hiperplazia osoasă are loc mai rapid de la 12 la 20 de săptămâni (Fig. 2C) în comparație cu grupul NPE, nu se observă nicio schimbare semnificativă la vertebral modelat modelat corpuri; Sham Group și ME Group (Fig. 2C) 2A, B).
(A) Suprafața corpului vertebral la porțiunea implantată este foarte netedă, gaura se vindecă bine și nu există hiperplazie în corpul vertebral. (B) Forma locului implantat în grupul ME este similară cu cea din grupul de operare sham și nu există nicio schimbare evidentă în apariția locului implantat în timp. (C) Hiperplazia osoasă a apărut la locul implantat în grupul NPE. Hiperplazia osoasă a crescut rapid și chiar s -a extins prin discul intervertebral la corpul vertebral contralateral.
Analiza histologică oferă informații mai detaliate despre formarea oaselor. Figura 3 prezintă fotografiile secțiunilor postoperatorii colorate cu H&E. În grupul de operare de șam, condrocitele au fost bine aranjate și nu a fost detectată nicio proliferare celulară (Fig. 3A). Situația din grupul ME a fost similară cu cea din grupul de operare de rușine (Fig. 3B). Cu toate acestea, în grupul NPE, la locul de implantare au fost observate un număr mare de condrocite și proliferarea celulelor asemănătoare cu NP (Fig. 3C);
(A) Trabecule pot fi văzute în apropierea plăcii de capăt, condrocitele sunt aranjate perfect cu dimensiunea și forma uniformă a celulelor și fără proliferare (de 40 de ori). (B) Starea locului de implantare în grupul ME este similară cu cea a grupului Sham. Se pot observa trabecule și condrocite, dar nu există o proliferare evidentă la locul de implantare (de 40 de ori). (B) Se poate observa că condrocitele și celulele asemănătoare cu NP proliferează semnificativ, iar forma și dimensiunea condrocitelor sunt inegale (de 40 de ori).
Expresia mRNA interleukină 4 (IL-4), ARNm interleukin 17 (IL-17) și ARNm interferon γ (IFN-y) au fost observate atât în ​​grupele NPE, cât și în ME. Când au fost comparate nivelurile de expresie ale genelor țintă, expresiile genice ale IL-4, IL-17 și IFN-y au fost semnificativ crescute în grupul NPE în comparație cu cele ale grupului ME și a grupului de operare ticălos (Fig. 4) (P <0,05). În comparație cu grupul de operare de fictiv, nivelurile de expresie ale IL-4, IL-17 și IFN-y în grupul M au crescut doar ușor și nu au ajuns la o schimbare statistică (p> 0.05).
Expresia ARNm a IL-4, IL-17 și IFN-y în grupul NPE a arătat o tendință semnificativ mai mare decât cele din grupul de operare Sham și grupul ME (p <0.05).
În schimb, nivelurile de expresie din grupul ME nu au arătat nicio diferență semnificativă (p> 0.05).
Analiza Western blot a fost efectuată folosind anticorpi disponibili comercial împotriva IL-4 și IL-17 pentru a confirma modelul de expresie ARNm modificat. Așa cum se arată în Figurile 5A, B, în comparație cu grupul ME și grupul de operare sham, nivelurile proteice ale IL-4 și IL-17 în grupul NPE au fost semnificativ crescute (p <0,05). În comparație cu grupul de operare de fictiv, nivelurile de proteine ​​ale IL-4 și IL-17 din grupul ME nu au reușit să ajungă la modificări semnificative statistic (p> 0.05).
(A) Nivelurile proteice ale IL-4 și IL-17 în grupul NPE au fost semnificativ mai mari decât cele din grupul ME și grupul placebo (P <0.05). (B) Histograma Western blot.
Datorită numărului limitat de probe umane obținute în timpul operației, studiile clare și detaliate asupra patogenezei MC sunt oarecum dificile. Am încercat să stabilim un model animal de MC pentru a studia mecanismele sale patologice potențiale. În același timp, evaluarea radiologică, evaluarea histologică și evaluarea biologică moleculară au fost utilizate pentru a urma cursul MC indus de autograftul NP. Drept urmare, modelul de implantare NP a dus la o modificare treptată a intensității semnalului de la 12 săptămâni la 20 de săptămâni (semnal scăzut amestecat în secvențe T1W și semnal scăzut în secvențe T2W), indicând modificările țesutului și histologic și molecular Evaluările biologice au confirmat rezultatele studiului radiologic.
Rezultatele acestui experiment arată că modificările vizuale și histologice au avut loc la locul încălcării corpului vertebral în grupul NPE. În același timp, expresia genelor IL-4, IL-17 și IFN-y, precum și IL-4, IL-17 și IFN-y au fost observate, ceea ce indică faptul că încălcarea țesutului pulposus nucleu autolog în vertebral Corpul poate provoca o serie de semnaluri și modificări morfologice. Este ușor de constatat că caracteristicile semnalului corpurilor vertebrale ale modelului animal (semnal scăzut în secvența T1W, semnal mixt și semnal scăzut în secvența T2W) sunt foarte similare cu cele ale celulelor vertebrale umane, iar caracteristicile RMN, de asemenea Confirmați observațiile histologiei și anatomiei brute, adică modificările celulelor corpului vertebral sunt progresive. Deși răspunsul inflamator cauzat de traumatisme acute poate apărea la scurt timp după puncție, rezultatele RMN au arătat că creșterea progresivă a modificărilor semnalului au apărut la 12 săptămâni după puncție și au persistat până la 20 de săptămâni fără semne de recuperare sau inversare a modificărilor RMN. Aceste rezultate sugerează că NP -ul vertebral autolog este o metodă fiabilă pentru stabilirea MV progresivă la iepuri.
Acest model de puncție necesită o abilitate adecvată, timp și efort chirurgical. În experimentele preliminare, disecția sau stimularea excesivă a structurilor ligamentare paravertebrale poate duce la formarea osteofitelor vertebrale. Trebuie să aveți grijă să nu deteriorați sau să iritați discurile adiacente. Deoarece adâncimea de penetrare trebuie controlată pentru a obține rezultate consistente și reproductibile, am făcut manual un dop prin tăierea tecii unui ac lung de 3 mm. Utilizarea acestui dop asigură o adâncime uniformă de foraj în corpul vertebral. În experimentele preliminare, trei chirurgi ortopedici implicați în operație au găsit ace de calibru 16 mai ușor de lucrat cu ace de calibru 18 sau alte metode. Pentru a evita sângerarea excesivă în timpul forajului, menținerea acului încă o perioadă va oferi o gaură de inserție mai potrivită, ceea ce sugerează că un anumit grad de MC poate fi controlat în acest fel.
Deși multe studii au vizat MC, se știe puțin despre etiologia și patogeneza MC25,26,27. Pe baza studiilor noastre anterioare, am constatat că autoimunitatea joacă un rol cheie în apariția și dezvoltarea MC12. Acest studiu a examinat expresia cantitativă a IL-4, IL-17 și IFN-y, care sunt principalele căi de diferențiere ale celulelor CD4+ după stimularea antigenului. În studiul nostru, în comparație cu grupul negativ, grupul NPE a avut o expresie mai mare de IL-4, IL-17 și IFN-y, iar nivelurile proteice ale IL-4 și IL-17 au fost, de asemenea, mai mari.
Clinic, expresia ARNm IL-17 este crescută la celulele NP de la pacienții cu hernie de disc28. Nivelurile crescute de expresie IL-4 și IFN-y au fost, de asemenea, găsite într-un model acut de hernie de disc necompresiv în comparație cu controalele sănătoase29. IL-17 joacă un rol esențial în inflamație, leziuni țesuturi în bolile autoimune30 și îmbunătățește răspunsul imun la IFN-y31. Leziuni îmbunătățite de țesuturi mediate de IL-17 a fost raportată la șoarecii MRL/LPR32 și la șoarecii susceptibili de autoimunitate33. IL-4 poate inhiba expresia citokinelor proinflamatorii (cum ar fi IL-1β și TNFα) și activarea macrofagelor34. S-a raportat că expresia ARNm a IL-4 a fost diferită în grupul NPE în comparație cu IL-17 și IFN-y în același timp; Expresia ARNm a IFN-y în grupul NPE a fost semnificativ mai mare decât cea din celelalte grupuri. Prin urmare, producția de IFN-y poate fi un mediator al răspunsului inflamator indus de intercalarea NP. Studiile au arătat că IFN-y este produs de mai multe tipuri de celule, incluzând celule T ajutor de tip 1, celule ucigașe naturale și macrofage35,36 și este o citokină pro-inflamatorie cheie care promovează răspunsurile imune37.
Acest studiu sugerează că răspunsul autoimun poate fi implicat în apariția și dezvoltarea MC. Luoma și colab. a constatat că caracteristicile semnalului MC și NP proeminente sunt similare pe RMN și ambele prezintă un semnal ridicat în secvența T2W38. Unele citokine s-au confirmat că sunt strâns asociate cu apariția MC, cum ar fi IL-139. Ma și colab. a sugerat că proeminența ascendentă sau descendentă a NP poate avea o influență mare asupra apariției și dezvoltării MC12. Bobechko40 și Herzbein și colab.41 au raportat că NP este un țesut imunotolerant care nu poate intra în circulația vasculară de la naștere. Protruziunile NP introduc organisme străine în alimentatia cu sânge, mediază astfel reacțiile autoimune locale42. Reacțiile autoimune pot induce un număr mare de factori imunitari, iar atunci când acești factori sunt expuși continuu la țesuturi, pot provoca modificări în semnalizare43. În acest studiu, supraexpresia IL-4, IL-17 și IFN-y sunt factori imunitari tipici, dovedind în continuare relația strânsă între NP și MCS44. Acest model animal imită bine descoperirea NP și intrarea în placa de capăt. Acest proces a relevat în continuare impactul autoimunității asupra MC.
După cum era de așteptat, acest model animal ne oferă o posibilă platformă pentru a studia MC. Cu toate acestea, acest model mai are unele limitări: în primul rând, în faza de observare a animalelor, unii iepuri în stadiu intermediar trebuie să fie eutanasiați pentru testarea biologiei histologice și moleculare, astfel încât unele animale „nu cad” în timp. În al doilea rând, deși în acest studiu sunt stabilite trei puncte de timp, din păcate, am modelat doar un singur tip de MC (MoDic Type I Change), deci nu este suficient pentru a reprezenta procesul de dezvoltare a bolilor umane și trebuie să fie stabilite mai multe puncte de timp pentru Observați mai bine toate modificările semnalului. În al treilea rând, modificările structurii țesuturilor pot fi într -adevăr arătate în mod clar prin colorarea histologică, dar unele tehnici specializate pot dezvălui mai bine modificările microstructurale din acest model. De exemplu, a fost utilizată microscopie ușoară polarizată pentru a analiza formarea fibrocartilajului în discurile intervertebrale de iepure45. Efectele pe termen lung ale NP asupra MC și EndPlate necesită studii suplimentare.
Cincizeci și patru de iepuri albi de sex masculin din Noua Zeelandă (greutate de aproximativ 2,5-3 kg, vârsta de 3-3,5 luni) au fost împărțiți aleatoriu în grupul de operare fictiv, grupul de implantare musculară (grupul ME) și grupul de implantare a rădăcinii nervoase (grupul NPE). Toate procedurile experimentale au fost aprobate de Comitetul de etică al Spitalului Tianjin, iar metodele experimentale au fost efectuate în conformitate cu orientările aprobate.
S -au făcut unele îmbunătățiri la tehnica chirurgicală a S. sobajima 46. Fiecare iepure a fost plasat într -o poziție de reocupare laterală, iar suprafața anterioară a cinci discuri intervertebrale lombare consecutive (IVD) a fost expusă folosind o abordare retroperitoneală posterolaterală. Fiecare iepure a primit anestezie generală (20% uretan, 5 ml/kg prin vena urechii). O incizie longitudinală a pielii a fost făcută de la marginea inferioară a coastelor până la placa pelvină, ventrală de 2 cm până la mușchii paravertebrali. Coloana vertebrală anterolaterală dreaptă de la L1 la L6 a fost expusă prin disecția ascuțită și contondentă a țesutului subcutanat suprapus, țesutului retroperitoneal și mușchilor (Fig. 6A). Nivelul discului a fost determinat folosind bara pelvină ca reper anatomic pentru nivelul discului L5-L6. Folosiți un ac de puncție cu calibru 16 pentru a găuri o gaură lângă placa de capăt a vertebrei L5 până la o adâncime de 3 mm (Fig. 6B). Utilizați o seringă de 5 ml pentru a aspira nucleul autolog pulposus în discul intervertebral L1-L2 (Fig. 6C). Îndepărtați nucleul pulposus sau mușchi în conformitate cu cerințele fiecărui grup. După ce gaura de foraj este adâncită, suturile absorbabile sunt plasate pe fascia profundă, fascia și pielea superficială, având grijă să nu deterioreze țesutul periosteal al corpului vertebral în timpul operației.
(A) Discul L5 -L6 este expus printr -o abordare retroperitoneală posterolaterală. (B) Utilizați un ac de calibru 16 pentru a găuri o gaură în apropierea plăcii de capăt L5. (C) MF -urile autologe sunt recoltate.
Anestezia generală a fost administrată cu 20% uretan (5 ml/kg) administrat prin vena urechii, iar radiografiile coloanei lombare au fost repetate la 12, 16 și 20 de săptămâni postoperator.
Iepurii au fost sacrificați prin injecție intramusculară de ketamină (25,0 mg/kg) și pentobarbital de sodiu intravenos (1,2 g/kg) la 12, 16 și 20 de săptămâni după operație. Întreaga coloană vertebrală a fost eliminată pentru analiza histologică și s -a efectuat o analiză reală. Pentru a detecta modificările factorilor imunitari.
Examinările RMN au fost efectuate la iepuri folosind un magnet clinic de 3,0 T (GE Medical Systems, Florence, SC) echipat cu un receptor de bobină de membre ortogonale. Iepurii au fost anesteziați cu 20% uretan (5 ml/kg) prin vena urechii și apoi au fost plasate supine în magnet cu regiunea lombară centrată pe o bobină de suprafață circulară cu diametrul de 5 inci (GE Medical Systems). Au fost obținute imagini de localizare coronale T2 (TR, 1445 ms; TE, 37 ms) pentru a defini locația discului lombar de la L3-L4 la L5-L6. Planul sagital T2 a fost achiziționată cu următoarele setări: secvență rapidă de ecou spin-ecou cu un timp de repetare (TR) de 2200 ms și un timp ecou (TE) de 70 ms, matrice; câmp vizual de 260 și opt stimuli; Grosimea de tăiere a fost de 2 mm, decalajul a fost de 0,2 mm.
După ce a fost făcută ultima fotografie și ultimul iepure a fost ucis, rușina, mușchii încorporați și discurile NP au fost eliminate pentru examinarea histologică. Țesuturile au fost fixate în formalină tamponată neutră de 10% timp de 1 săptămână, decalcificate cu acid etilenediaminetetraacetic și secționate cu parafină. Blocurile de țesut au fost încorporate în parafină și tăiate în secțiuni sagitale (5 μm grosime) folosind un microtom. Secțiunile au fost colorate cu hematoxilină și eosină (H&E).
După colectarea discurilor intervertebrale de la iepurii din fiecare grup, ARN total a fost extras folosind o coloană UNIQ-10 (Shanghai Sangon Biotechnology Co., Ltd., China), conform instrucțiunilor producătorului și un sistem de transcripție inversă II II II (Promega Inc. , Madison, WI, SUA). S -a efectuat transcrierea inversă.
RT-QPCR a fost efectuat folosind un Prism 7300 (Applied Biosystems Inc., SUA) și SYBR Green Jump Start TAQ REASTYMIX (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, SUA), conform instrucțiunilor producătorului. Volumul de reacție PCR a fost de 20 µl și a conținut 1,5 µl de ADNc diluat și 0,2 μM din fiecare primer. Primerele au fost proiectate de Oligoperfect Designer (Invitrogen, Valencia, CA) și fabricate de Nanjing Golden Stewart Biotechnology Co., Ltd. (China) (Tabelul 1). Au fost utilizate următoarele condiții de ciclism termic: etapa inițială de activare a polimerazei la 94 ° C timp de 2 min, apoi 40 de cicluri de 15 s fiecare la 94 ° C pentru denaturarea șabloanelor, recoacere timp de 1 min la 60 ° C, extensie și fluorescență. Măsurătorile au fost efectuate timp de 1 min la 72 ° C. Toate eșantioanele au fost amplificate de trei ori și valoarea medie a fost utilizată pentru analiza RT-QPCR. Datele de amplificare au fost analizate folosind FlexStation 3 (Molecular Devices, Sunnyvale, CA, SUA). IL-4, IL-17 și expresia genei IFN-y au fost normalizate la controlul endogen (ACTB). Nivelurile relative de expresie ale mRNA țintă au fost calculate folosind metoda 2-ΔΔCT.
Proteina totală a fost extrasă din țesuturi folosind un omogenizator de țesut în tampon de liză RIPA (care conține un cocktail de protează și inhibitor de fosfatază) și apoi centrifugat la 13.000 rpm timp de 20 min la 4 ° C pentru a îndepărta resturile de țesut. Cincizeci de micrograme de proteine ​​au fost încărcate pe banda, separate cu 10% SDS-PAGE, apoi transferate într-o membrană PVDF. Blocarea a fost efectuată în 5% lapte uscat nonfat în soluție salină tamponată cu Tris (TBS) conținând 0,1% Tween 20 timp de 1 oră la temperatura camerei. Membrana a fost incubată cu anticorp primar anti-decorină de iepure (diluat 1: 200; Boster, Wuhan, China) (diluat 1: 200; Bioss, Beijing, China) peste noapte la 4 ° C și a reacționat în a doua zile; cu anticorp secundar (imunoglobulina G de capră anti-iepure G la 1: 40.000 diluție) combinată cu peroxidaza de hrean (Boster, Wuhan, China) timp de 1 oră la temperatura camerei. Semnalele Western blot au fost detectate prin creșterea chemiluminiscenței pe membrana chemiluminescentă după iradierea cu raze X. Pentru analiza densitometrică, blocurile au fost scanate și cuantificate folosind software -ul Bandscan, iar rezultatele au fost exprimate ca raportul dintre imunoreactivitatea genei țintă și imunoreactivitatea tubulinei.
Calculele statistice au fost efectuate folosind pachetul software SPSS16.0 (SPSS, SUA). Datele colectate în timpul studiului au fost exprimate ca medie ± deviație standard (medie ± SD) și analizate folosind analiza măsurilor repetate unidirecționale ale varianței (ANOVA) pentru a determina diferențele dintre cele două grupuri. P <0,05 a fost considerat semnificativ statistic.
Astfel, stabilirea unui model animal de MC prin implantarea NP -urilor autologe în corpul vertebral și efectuarea observației macroanatomice, analiza RMN, evaluarea histologică și analiza biologică moleculară poate deveni un instrument important pentru evaluarea și înțelegerea mecanismelor MC uman și dezvoltarea de noi terapeutice intervenții.
Cum să citez acest articol: Han, C. și colab. Un model animal de modificări modice a fost stabilit prin implantarea nucleului autolog pulposus în osul subcondral al coloanei vertebrale lombare. Sci. Rep. 6, 35102: 10.1038/SREP35102 (2016).
Weishaupt, D., Zanetti, M., Hodler, J., și Boos, N. Imagistica prin rezonanță magnetică a coloanei vertebrale lombare: prevalența herniei și retenția discului, compresia rădăcinilor nervoase, anomalii de plăci de capăt și osteoartrită articulară fațetă în voluntarii asimptomatici asimptomatici . rata. Radiologie 209, 661–666, doi: 10.1148/radiologie.209.3.9844656 (1998).
Kjaer, P., Korsholm, L., Bendix, T., Sorensen, JS și Leboeuf-Eed, K. Modificări modice și relația lor cu concluziile clinice. European Spine Journal: Publicarea oficială a Societății Europene a Spinei, Societatea Europeană de deformare a coloanei vertebrale și Societatea Europeană pentru Cercetări ale coloanei cervicale 15, 1312–1319, doi: 10.1007/s00586-006-0185-X (2006).
Kuisma, M., și colab. Modificări modice ale finalelor vertebrale lombare: prevalență și asociere cu dureri de spate scăzute și sciatică la lucrătorii de sex masculin de vârstă mijlocie. Coloana vertebrală 32, 1116–1122, doi: 10.1097/01.brs.0000261561.12944.ff (2007).
De Roos, A., Kressel, H., Spritzer, K. și Dalinka, M. RMN a modificărilor măduvei osoase în apropierea plăcii de capăt în boala degenerativă a coloanei vertebrale lombare. AJR. American Journal of Radiology 149, 531–534, doi: 10.2214/ajr.149.3.531 (1987).
Modic, MT, Steinberg, PM, Ross, JS, Masaryk, TJ și Carter, JR Boala degenerativă a discului: evaluarea modificărilor măduvei vertebrale cu RMN. Radiologie 166, 193–199, doi: 10.1148/radiologie.166.1.3336678 (1988).
Modic, MT, Masaryk, TJ, Ross, JS și Carter, Jr Imaging of Boala Dec Disc. Radiologie 168, 177-186, doi: 10.1148/radiologie.168.1.3289089 (1988).
Jensen, TS și colab. Predictori ai modificărilor semnalului end -ului neovertebral (MODIC) în populația generală. European Spine Journal: Publicarea oficială a Societății Europene a Spinei, Societatea Europeană de deformare a coloanei vertebrale și Societatea Europeană pentru Cercetarea Spinei Cervicale, Divizia 19, 129-135, DOI: 10.1007/S00586-009-1184-5 (2010).
Albert, HB și Mannisch, K. Modiș se schimbă după hernia cu disc lombar. European Spine Journal: Publicarea oficială a European Spine Society, The European Society of Spinal Deformity and the European Society for Cervical Spoting Research 16, 977–982, doi: 10.1007/s00586-007-0336-8 (2007).
Kerttula, L., Luoma, K., Vehmas, T., Gronblad, M. și Kaapa, E. Modificările de tip I Modic pot prezice degenerarea rapidă a discului deformațional progresiv: un studiu prospectiv de un an. European Spine Journal 21, 1135–1142, doi: 10.1007/s00586-012-2147-9 (2012).
Hu, ZJ, Zhao, FD, Fang, XQ și Fan, SW ModiC Modificări: Cauze posibile și contribuție la degenerarea discului lombar. Ipoteze medicale 73, 930–932, doi: 10.1016/j.mehy.2009.06.038 (2009).
Krok, HV Ruptura discului intern. Probleme de prolaps de disc de peste 50 de ani. Coloana vertebrală (Phila Pa 1976) 11, 650–653 (1986).


Timpul post: 13-2024